Medizin

enzymgebundener Immunosorbens-Assay | Definition, Verwendung und Methode

Enzymgebundener Immunosorbens-Assay (ELISA) , auch Enzymimmunoassay genannt , biochemisches Verfahren, bei dem ein durch eine enzymatische Reaktion erzeugtes Signal verwendet wird, um die Menge einer bestimmten Substanz in einer Lösung nachzuweisen und zu quantifizieren. Enzymgebundene Immunosorbens-Assays (ELISAs) werden typischerweise zum Nachweis von Antigenen verwendet , können jedoch auch zum Nachweis anderer Substanzen verwendet werden, einschließlich Antikörpern , Hormonen und Arzneimitteln . ELISAs sind empfindlich und spezifisch sowie relativ kostengünstig, was sie als vorläufige Diagnosewerkzeuge nützlich macht. ELISAs werden beispielsweise häufig bei HIV-Tests ( Human Immunodeficiency Virus ) und ähnlichen Anwendungen eingesetzt.

Ein Schlüsselaspekt eines ELISA ist, dass für die interessierende Substanz selektive Antikörper an einer festen Oberfläche (z. B. den Vertiefungen einer Polystyrol- Multiwell-Platte) fixiert sind. Die zu testende Lösung wird in die Vertiefungen gegeben, gefolgt von der Zugabe eines Antikörper- Enzym- Konjugats. Die Platte wird dann vorsichtig gewaschen, um ungebundenes Enzymkonjugat zu entfernen, und das Substrat des Enzyms (die Substanz, die es modifiziert) wird zugegeben. Enzym, das in den Vertiefungen an Antikörper gebunden wurde, reagiert und erzeugt ein farbiges Produkt, das spektrophotometrisch nachgewiesen und gemessen werden kann .

Es gibt zahlreiche Möglichkeiten, wie ein ELISA entworfen werden kann. Während beispielsweise ein Assay verwendet werden kann, um das Vorhandensein eines Antigens in einer Probe zu bewerten , kann ein anderer entworfen werden, um das Vorhandensein eines Antikörpers nachzuweisen. Im ersten Fall wird ein für das Antigen spezifischer Antikörper verwendet, um eine Oberfläche zu beschichten, und eine Probe, die möglicherweise das Antigen enthält, wird zugegeben. Im zweiten Fall wird die Oberfläche mit dem Antigen beschichtet und die zu testende Probe auf das Vorhandensein von Antikörpern zugegeben. In beiden Szenarien wird dann ein enzymgebundener Sekundärantikörper verwendet, um die Bildung von Antigen-Antikörper-Komplexen nachzuweisen. Ein dritter Ansatz ist akompetitiver ELISA, bei dem Antigen-Antikörper-Komplexe zu Antigen-markierten Vertiefungen gegeben werden, gefolgt von der Zugabe eines sekundären Antikörpers, der spezifisch für den ursprünglich verwendeten Antikörper ist.